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    • 专利摘要:
    一種改變球形蛋白構形之方法，其係藉由控制球形蛋白之濃度及其吸附至氣/液界面所需之時間來改變球形蛋白之蛋白質單分子層的構形成為主要具有β-平板或α-螺旋，並且可依需求使用基板垂直沈積轉移取出具β-平板或α-螺旋構形之蛋白質單分子層以進行各種應用。本發明可在保有原有生物分子功能的情況下，改變生物分子三維結構以應所需，且不需額外使用任何物理/化學處理方式來引起構形的改變。
    公开号:TW201315740A
    申请号:TW100136951
    申请日:2011-10-12
    公开日:2013-04-16
    发明作者:Yuh-Lang Lee；Ke-Hsuan Wang
    申请人:Univ Nat Cheng Kung；
    IPC主号:C07K1-00
    专利说明:
    改變球形蛋白構形之方法
    本發明係關於一種改變球形蛋白構形之方法，特別是關於一種藉由控制球形蛋白之濃度及其吸附至氣/液界面所需之時間來改變球形蛋白之蛋白質單分子層的構形之方法。
    現今，以生物分子為主軸之研究發展十分廣泛，其中如生物元件的開發與製備更是備受各界矚目；在許多生物分子中，蛋白質(proteins)為生命體構成的主要物質，也是生命活動的主要承擔者，因此研究蛋白質分子的三維結構及其功能對生物工程的開發具有十分重要的意義。蛋白質分子是由基本物質-胺基酸(amino acids)所組成之多胜肽鏈(polypeptides)，藉由共價鍵與非共價鍵的相互結合，以形成一能量最低、分子結構穩定並擁有特定生理功用之三維立體結構。
    當外界環境改變時，蛋白質分子通常會適當的調整其三維結構，以維持能量上的平衡及其生理功用；而不可逆的情形則是蛋白質分子因受到物理或化學因素影響而完全失去其三維結構規則性，喪失其生理功能，此種情況稱為蛋白質的變性(denaturation)。因此，若能在保有原有蛋白質分子生理功能下，適當的獲得同一蛋白質之數種不同三維結構，將有助於對該蛋白質之分子生理功能進行各種實驗或應用。例如，對某些生物檢測晶片而言，其晶片上之檢測區可能需要某種蛋白質之特定三維結構(例如α-螺旋或β-平板)，才能有效提供檢測功能，因此必需設法大量取得具有所需三維結構之蛋白質，以便進行大規模量產應用。
    以現有蛋白質構形(conformation)改變技術來說，大多是使用酸、鹼、尿素、有機溶劑、重金屬、熱、壓力、紫外光、超音波及/或X-射線等物理或化學的處理方式來造成蛋白質分子構形的改變。然而，在這些物理/化學處理的過程中，若處理條件未妥善準確控制，則時常造成蛋白質分子不可逆的變性，因而完全失去三維結構規則性並喪失其生理功能。再者，在製程成本上，使用物理/化學處理劑也有一定的機台或藥劑成本，並且對環境或人體也有相當程度的傷害。
    因此，確實仍有必要提供一種改變球形蛋白構形之方法，以解決習用技術所存在的問題。
    本發明之主要目的在於提供一種改變球形蛋白構形之方法，其係藉由控制球形蛋白之濃度及其吸附至氣/液界面所需之時間來改變球形蛋白之蛋白質單分子層的構形成為主要具有β-平板或α-螺旋，並且可依需求使用基板垂直沈積轉移取出具β-平板或α-螺旋構形之蛋白質單分子層以進行各種應用，因此本發明可在保有原有生物分子功能的情況下，改變生物分子三維結構以應所需，且不需額外使用任何物理/化學處理方式來引起構形的改變，故有利於簡化製備程序、確保球形蛋白分子活性、降低製備成本，及減少對環境的傷害性。
    為達上述之目的，本發明提供一種改變球形蛋白構形之方法，其包含下述步驟：提供一種球形蛋白(globular protein)；將該球形蛋白與水混合，以形成一混合液；靜置該混合液直到一第一時間點，以便使該混合液中之球形蛋白吸附至該混合液之一氣/液界面(air/liquid interface)，形成一蛋白質單分子層(monolayer)，此時該蛋白質單分子層具有一第一表面壓(surface pressure)且其構形主要為β-平板(sheet)；以及靜置該混合液直到一第二時間點，以便使該蛋白質單分子層具有一第二表面壓且其構形轉變成主要為α-螺旋(helix)，其中該第二表面壓大於該第一表面壓。
    在本發明之一實施例中，該球形蛋白選自葡萄糖氧化酵素(glucose oxidase，GOx)、牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)、血紅蛋白(haemoglobin)、免疫球蛋白(immunoglobulins)、肌紅蛋白(myoglobin)、細胞球蛋白(cytoglobin)、黃素血紅蛋白(flavohaemoglobins)、原球蛋白(protoglobin)、藍藻球蛋白(cyanoglobin)、儲鐵蛋白(ferritin)、磷脂酶C(phospholipase C)、刀豆球蛋白A(concanavalin A)、糜蛋白(chymotrypsin)、胰島素(insulin)、胰泌胰蛋白酶抑制素(pancreatic trypsin inhibitor)、溶菌酶(lysozyme)、纖維蛋白原(fibrinogen)、RNA酶A(RNase A)、乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase)、六碳糖激酶(hexokinase)或磷酸化酶(phosphorylase)。
    在本發明之一實施例中，該球形蛋白選自葡萄糖氧化酵素(GOx)，其在該混合液中之濃度介於4.98至19.92毫克/公升(mg/L)之間。該第一時間點是由靜置該混合液起算0.5至4小時；及該第二時間點是由靜置該混合液起算8小時或以上。該第一表面壓介於6至8毫牛頓/公尺(mN/m)之間；及該第二表面壓介於14至16 mN/m之間。在該第一時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例等於或小於0.09；及在該第二時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例等於或大於9.095。
    在本發明之一實施例中，該球形蛋白選自牛血清蛋白(BSA)，其在該混合液中之濃度介於0.01至0.08毫克/公升(mg/L)之間。該第一時間點是由靜置該混合液起算1.5至12小時；及該第二時間點是由靜置該混合液起算24小時或以上。該第一表面壓介於2至3毫牛頓/公尺(mN/m)之間；及該第二表面壓介於7至8 mN/m之間。在該第一時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例等於或小於2.07；及在該第二時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的所佔比例等於或大於6.14。
    在本發明之一實施例中，該球形蛋白選自血紅蛋白，其在該混合液中之濃度介於0.05至0.2毫克/公升(mg/L)之間。該第一時間點是由靜置該混合液起算1.5至12小時；及該第二時間點是由靜置該混合液起算24小時或以上。該第一表面壓介於2至3毫牛頓/公尺(mN/m)之間；及該第二表面壓介於7至8 mN/m之間。在該第一時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例等於或小於0.21；及在該第二時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的所佔比例等於或大於8.78。
    在本發明之一實施例中，該球形蛋白選自免疫球蛋白，其在該混合液中之濃度介於0.1至0.5毫克/公升(mg/L)之間。該第一時間點是由靜置該混合液起算1.5至12小時；及該第二時間點是由靜置該混合液起算24小時或以上。該第一表面壓介於2至3毫牛頓/公尺(mN/m)之間；及該第二表面壓介於7至8 mN/m之間。在該第一時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例等於或小於0.15；及在該第二時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的所佔比例等於或大於8.99。
    在本發明之一實施例中，在靜置該混合液直到該第一時間點的步驟中，另將該氣/液界面的蛋白質單分子層以垂直沈積的方式轉移至一第一基板上。
    在本發明之一實施例中，該第一基板選自生物晶片(biochip)基板、感測器(sensor)基板或檢測分析用(detected/analyzed)基板。例如，該第一基板選自石英基板、白金基板、硬式透明塑膠基板或可撓式透明塑膠基板。
    在本發明之一實施例中，在靜置該混合液直到該第二時間點的步驟中，另將該氣/液界面的蛋白質單分子層以垂直沈積的方式轉移至一第二基板上。
    在本發明之一實施例中，該第二基板選自生物晶片基板、感測器基板或檢測分析用基板。例如，該第二基板選自石英基板、白金基板、硬式透明塑膠基板或可撓式透明塑膠基板。
    為了讓本發明之上述及其他目的、特徵、優點能更明顯易懂，下文將特舉本發明較佳實施例，並配合所附圖式，作詳細說明如下。
    請參照第1圖所示，本發明第一實施例之改變球形蛋白構形之方法主要包含下列步驟：提供一種球形蛋白10；將該球形蛋白10與水混合，以形成一混合液20；靜置該混合液20直到一第一時間點，以便使該混合液20中之球形蛋白10吸附至該混合液20之一氣/液界面21，形成一蛋白質單分子層30，此時該蛋白質單分子層30具有一第一表面壓且其構形主要為β-平板；以及靜置該混合液20直到一第二時間點，以便使該蛋白質單分子層30具有一第二表面壓且其構形轉變成主要為α-螺旋，其中該第二表面壓大於該第一表面壓。本發明將於下文利用第1至6圖逐一詳細說明各實施例之上述各步驟的實施細節及其原理。
    首先，本發明第一實施例之改變球形蛋白構形之方法係先提供一種球形蛋白10。在本發明中，該球形蛋白10係可選自葡萄糖氧化酵素(glucose oxidase，GOx)、牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)、血紅蛋白(haemoglobin)、免疫球蛋白(immunoglobulins)、肌紅蛋白(myoglobin)、細胞球蛋白(cytoglobin)、黃素血紅蛋白(flavohaemoglobins)、原球蛋白(protoglobin)、藍藻球蛋白(cyanoglobin)、儲鐵蛋白(ferritin)、磷脂酶C(phospholipase C)、刀豆球蛋白A(concanavalin A)、糜蛋白(chymotrypsin)、胰島素(insulin)、胰泌胰蛋白酶抑制素(pancreatic trypsin inhibitor)、溶菌酶(lysozyme)、纖維蛋白原(fibrinogen)、RNA酶A(RNase A)、乙醇脫氫酶(alcohol dehydrogenase)、六碳糖激酶(hexokinase)或磷酸化酶(phosphorylase)。例如，在第一實施例中，本發明之球形蛋白10係以葡萄糖氧化酵素(GOx)為例。
    接著，如第1圖所示，本發明第一實施例之改變球形蛋白構形之方法係將該球形蛋白10與水混合，以形成一混合液20。在本步驟中，該球形蛋白10在該混合液中之濃度係依該球形蛋白10之種類而定，例如，在第一實施例中，當該球形蛋白10選自葡萄糖氧化酵素時，其在該混合液中之濃度則可介於4.98至19.92毫克/公升(mg/L)之間，例如該濃度較佳為9.96 mg/L，但並不限於此。
    接著，如第1及2圖所示，本發明第一實施例之改變球形蛋白構形之方法係：靜置該混合液20直到一第一時間點，以便使該混合液20中之球形蛋白10吸附至該混合液20之一氣/液界面21，形成一蛋白質單分子層30，此時該蛋白質單分子層30具有一第一表面壓且其構形主要為β-平板。在本實施例中，該混合液20係被注入到一容器且利用一表面壓量測裝置40量測其一氣/液界面21之表面壓，其中該混合液20之液面在此定義為一氣/液界面21，其係指該混合液20與外部大氣相接觸之界面；以及該容器可為Langmuir膜天平(Langmuir Film Balance)之容器，但並不限於此，例如其亦可為一般盛水之簡單容器。由開始靜置該混合液20起，該混合液20中之球形蛋白10將逐漸吸附至該混合液20之氣/液界面21，並形成一蛋白質單分子層30。
    在此同時，本發明可藉由該表面壓量測裝置40量測一蛋白質單分子層30隨吸附時間之表面壓變化，而此表面壓量測裝置40係與一電腦系統(未繪示)相連，因此可持續不斷的紀錄表面壓隨時間變化的統計值，從而繪製出第2圖之表面壓/時間之曲線圖。
    如第2圖所示，當該球形蛋白10選自葡萄糖氧化酵素時，本發明所述之第一時間點是指由靜置該混合液20起算約0.5至4小時的這段時間內的任一時間點，例如在第2圖起算後0.5小時的位置處。在第一時間點之這段期間(起算0.5至4小時)內，該蛋白質單分子層30之表面壓達到一幾近平衡狀態之階段，其表面壓大致維持在一第一表面壓左右，該第一表面壓大致介於6至8毫牛頓/公尺(mN/m)之間，例如約7.5 mN/m。此時，該混合液20中之球形蛋白10主要是以β-平板之構形吸附至該混合液20之氣/液界面21而形成該蛋白質單分子層30。
    請參照第3圖所示，為了檢測第一時間點這段期間之蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例，本發明係利用一第一基板50來以垂直沈積的方式將該氣/液界面21上的蛋白質單分子層30轉移至該第一基板50的表面上，在本實施例中該第一基板50是一檢測分析用基板，例如選自石英(玻璃)基板。本發明進行100次垂直沈積的動作，將100層之蛋白質單分子層30堆疊沈積在該第一基板50上(向下/向上移動之轉移速度分別為1及150 mm/min)，並接著以圓二色光譜儀(circular dichroism，CD)進行檢測該蛋白質單分子層30之二級結構。結果如下表1所示：

    如下表1所示，在該第一時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例係等於(或小於)0.09，亦即主要具有β-平板。再者，該蛋白質單分子層30堆疊沈積在該第一基板50上之層數則依使用需求而定。該第一基板50除了可以是一檢測分析用基板外，該第一基板50亦可選自生物晶片基板或感測器基板，該基板之材質亦不限於石英基板，例如亦可為白金基板、硬式透明塑膠基板或可撓式透明塑膠基板等，但並不限於此。
    最後，同樣請參照第1、2及3圖及表1所示，本發明第一實施例之改變球形蛋白構形之方法係：靜置該混合液20直到一第二時間點，以便使該蛋白質單分子層30具有一第二表面壓且其構形轉變成主要為α-螺旋，其中該第二表面壓大於該第一表面壓。在本步驟中，該第二時間點是由靜置該混合液20起算約8小時或以上的這段時間內的任一時間點，例如在第2圖起算後8小時的位置處。在第一及第二時間點之間的期間(起算4.5至7.5小時左右)內，該蛋白質單分子層30之表面壓產生了變化並且逐漸增高。接著，在第二時間點之這段期間(起算8小時或以上)內，該蛋白質單分子層30之表面壓則達到另一幾近平衡狀態之階段，其表面壓大致維持在一第二表面壓左右，該第二表面壓大致介於14至16毫牛頓/公尺(mN/m)之間，例如約15.5 mN/m。在該第二時間點時，該蛋白質單分子層30主要具有α-螺旋之構形，該蛋白質單分子層30中的α-螺旋/β-平板的比例變成等於(或大於)9.095，亦即主要具有α-螺旋。
    在本步驟及前一步驟中，由於該球形蛋白10之分子是不同種類之胺基酸所組成的巨大複合分子，因此該球形蛋白10本身即具有分佈不均之親、疏水性質，故本發明主要即利用該球形蛋白10之分子本身所具有之親、疏水性質，令該球形蛋白10由該混合液20中自發性地吸附至該氣/液界面21形成該蛋白質單分子層30，並利用該氣/液界面21的親疏水環境促使該球形蛋白10的分子構形進行轉換，藉以提供不同之分子構形，以供使用在不同之該球形蛋白10應用需求上。例如，在本步驟中，亦可類似上一步驟般，另將該氣/液界面21的蛋白質單分子層30以垂直沈積的方式轉移至一第二基板(未繪示)上，該蛋白質單分子層30堆疊沈積在該第二基板上之層數則依使用需求而定。該第二基板同樣可選自生物晶片基板、感測器基板或檢測分析用基板，及其材質可以為石英基板、白金基板、硬式透明塑膠基板或可撓式透明塑膠基板，但並不限於此。
    再者，請參照第4及5圖所示，本發明第一實施例利用該第一基板50垂直沈積了在第一時間點取得之蛋白質單分子層30(吸附時間0.5小時，α-螺旋/β-平板的比例等於或小於0.09)；或利用一第二基板50’垂直沈積了在第二時間點取得之蛋白質單分子層30(吸附時間8小時，α-螺旋/β-平板的比例等於或大於9.095)，來做為一工作電極。同時，以一白金平板為一輔助電極61，及以銀/氯化銀電極為一參考電極62。接著，將此三電極浸入一葡萄糖溶液70中，利用計時安培法來量測該第一基板50(或第二基板50’)之蛋白質單分子層30的球形蛋白10(即葡萄糖氧化酵素)催化該葡萄糖溶液70(0.5mM)轉換成葡萄糖酸(gluconic acid)與雙氧水(H2O2)時，提供一固定電位(0.6V對於銀/氯化銀電極)電解雙氧水所造成之電流變化值，並將其繪製成第5圖之電流/時間曲線圖。由第5圖之電流變化值可知，不論該第一基板50(吸附時間0.5小時)或第二基板50’(吸附時間8小時)表面上之球形蛋白10(即葡萄糖氧化酵素)主要是何種構形(β-平板或α-螺旋)，其皆保有原先之酶蛋白生理功能。
    請參照第6圖所示，本發明第二實施例係使用相同於上述改變球形蛋白構形之方法，但該第二實施例之球形蛋白10係選自牛血清蛋白(bovine serum albumin，BSA)，其在該混合液中之濃度介於0.01至0.08毫克/公升(mg/L)之間，例如0.02 mg/L。該第一時間點是由靜置該混合液起算約1.5至12小時，例如在第1.5小時的位置。該第二時間點是由靜置該混合液起算約24小時或以上，例如在第24小時的位置。該第一表面壓介於約2至3毫牛頓/公尺(mN/m)之間，例如約2.3 mN/m；及該第二表面壓介於約7至8 mN/m之間，例如約7.3 mN/m。在該第一時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例等於或小於2.07，亦即主要具有β-平板；在該第二時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的所佔比例等於或大於6.14，亦即主要具有α-螺旋。
    相似的，本發明第三實施例係使用相同於上述改變球形蛋白構形之方法，但該第三實施例之球形蛋白10係選自血紅蛋白(haemoglobin)，其在該混合液中之濃度介於0.05至0.2毫克/公升(mg/L)之間，例如0.1 mg/L。該第一時間點是由靜置該混合液起算約1.5至12小時，例如在第1.5小時的位置。該第二時間點是由靜置該混合液起算約24小時或以上，例如在第24小時的位置。該第一表面壓介於約2至3毫牛頓/公尺(mN/m)之間，例如約2.3 mN/m；及該第二表面壓介於約7至8 mN/m之間，例如約7.3 mN/m。在該第一時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例等於或小於0.21，亦即主要具有β-平板；在該第二時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的所佔比例等於或大於8.78，亦即主要具有α-螺旋。
    另外，本發明第四實施例係使用相同於上述改變球形蛋白構形之方法，但該第四實施例之球形蛋白10係選自免疫球蛋白(immunoglobulins)，其在該混合液中之濃度介於0.1至0.5毫克/公升(mg/L)之間，例如0.25 mg/L。該第一時間點是由靜置該混合液起算約1.5至12小時，例如在第1.5小時的位置。該第二時間點是由靜置該混合液起算約24小時或以上，例如在第24小時的位置。該第一表面壓介於約2至3毫牛頓/公尺(mN/m)之間，例如約2.3 mN/m；及該第二表面壓介於約7至8 mN/m之間，例如約7.3 mN/m。在該第一時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例等於或小於0.15，亦即主要具有β-平板；在該第二時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的所佔比例等於或大於8.99，亦即主要具有α-螺旋。
    如上所述，相較於現有蛋白質構形改變技術使用物理或化學處理方式來改變蛋白質分子構形容易導致蛋白質分子喪失其生理功能並且會增加處理成本及危害環境或人體等缺點，第1至6圖之本發明藉由控制該球形蛋白10之濃度及其吸附至該氣/液界面21所需之時間來改變該球形蛋白10之蛋白質單分子層30的構形成為主要具有β-平板或α-螺旋，並且可依需求使用該第一及第二基板50、50’來垂直沈積轉移取出具β-平板或α-螺旋構形之蛋白質單分子層30以進行各種應用，因此本發明上述技術可以在保有原有生物分子功能的情況下，改變生物分子三維結構以應所需，且不需額外使用任何物理/化學處理方式來引起構形的改變，故有利於簡化製備程序、確保球形蛋白分子活性、降低製備成本，及減少對環境的傷害性。
    雖然本發明已以較佳實施例揭露，然其並非用以限制本發明，任何熟習此項技藝之人士，在不脫離本發明之精神和範圍內，當可作各種更動與修飾，因此本發明之保護範圍當視後附之申請專利範圍所界定者為準。
    10．．．球形蛋白
    20．．．混合液
    21．．．氣/液界面
    30．．．蛋白質單分子層
    40．．．表面壓量測裝置
    50．．．第一基板
    50’．．．第二基板
    61．．．輔助電極
    62．．．參考電極
    70．．．葡萄糖溶液
    第1圖：本發明第一實施例之改變球形蛋白構形之方法利用表面壓量測裝置量測蛋白質單分子層的表面壓之示意圖。
    第2圖：本發明第一實施例之改變球形蛋白構形之方法之球形蛋白(葡萄糖氧化酵素，GOx)的蛋白質單分子層之表面壓/時間曲線圖。
    第3圖：本發明第一實施例之改變球形蛋白構形之方法將蛋白質單分子層垂直沈積轉移至第一基板上之示意圖。
    第4圖：本發明第一實施例之改變球形蛋白構形之方法將第一及/或第二基板浸入葡萄糖溶液中進行計時安培法之示意圖。
    第5圖：本發明第4圖計時安培法之電流/時間曲線圖。
    第6圖：本發明第二實施例之改變球形蛋白構形之方法之球形蛋白牛血清蛋白(BSA)的蛋白質單分子層之表面壓/時間曲線圖。
    10．．．球形蛋白
    20．．．混合液
    21．．．氣/液界面
    30．．．蛋白質單分子層
    40．．．表面壓量測裝置
    权利要求:
    Claims (14)
    [1] 一種改變球形蛋白構形之方法，其包含步驟：提供一種球形蛋白；將該球形蛋白與水混合，以形成一混合液；靜置該混合液直到一第一時間點，以便使該混合液中之球形蛋白吸附至該混合液之一氣/液界面，形成一蛋白質單分子層，此時該蛋白質單分子層具有一第一表面壓且其構形主要為β-平板；以及靜置該混合液直到一第二時間點，以便使該蛋白質單分子層具有一第二表面壓且其構形轉變成主要為α-螺旋，其中該第二表面壓大於該第一表面壓。
    [2] 如申請專利範圍第1項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中該球形蛋白選自葡萄糖氧化酵素、牛血清蛋白、血紅蛋白、免疫球蛋白、肌紅蛋白、細胞球蛋白、黃素血紅蛋白、原球蛋白、藍藻球蛋白、儲鐵蛋白、磷脂酶C、刀豆球蛋白A、糜蛋白、胰島素、胰泌胰蛋白酶抑制素、溶菌酶、纖維蛋白原、RNA酶A、乙醇脫氫酶、六碳糖激酶或磷酸化酶。
    [3] 如申請專利範圍第2項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中該球形蛋白選自葡萄糖氧化酵素，其在該混合液中之濃度介於4.98至19.92毫克/公升之間。
    [4] 如申請專利範圍第3項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中該第一時間點是由靜置該混合液起算0.5至4小時；及該第二時間點是由靜置該混合液起算8小時或以上。
    [5] 如申請專利範圍第3項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中該第一表面壓介於6至8毫牛頓/公尺之間；及該第二表面壓介於14至16毫牛頓/公尺之間。
    [6] 如申請專利範圍第3項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中在該第一時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例等於或小於0.09；及在該第二時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例等於或大於9.095。
    [7] 如申請專利範圍第2項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中該球形蛋白選自牛血清蛋白，其在該混合液中之濃度介於0.01至0.08毫克/公升之間。
    [8] 如申請專利範圍第7項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中該第一時間點是由靜置該混合液起算1.5至12小時；及該第二時間點是由靜置該混合液起算24小時或以上。
    [9] 如申請專利範圍第7項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中該第一表面壓介於2至3毫牛頓/公尺之間；及該第二表面壓介於7至8毫牛頓/公尺之間。
    [10] 如申請專利範圍第7項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中在該第一時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的比例等於或小於2.07；及在該第二時間點時，該蛋白質單分子層中的α-螺旋/β-平板的所佔比例等於或大於6.14。
    [11] 如申請專利範圍第1項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中在靜置該混合液直到該第一時間點的步驟中，另將該氣/液界面的蛋白質單分子層以垂直沈積的方式轉移至一第一基板上。
    [12] 如申請專利範圍第11項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中該第一基板選自生物晶片基板、感測器基板或檢測分析用基板。
    [13] 如申請專利範圍第1項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中在靜置該混合液直到該第二時間點的步驟中，另將該氣/液界面的蛋白質單分子層以垂直沈積的方式轉移至一第二基板上。
    [14] 如申請專利範圍第13項所述之改變球形蛋白構形之方法，其中該第二基板選自生物晶片基板、感測器基板或檢測分析用基板。
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    同族专利:
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    TWI444387B|2014-07-11|
    US20130095551A1|2013-04-18|
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    引用文献:
    公开号 | 申请日 | 公开日 | 申请人 | 专利标题
    CN112452506A|2020-11-06|2021-03-09|五原县沃丰生物科技有限责任公司|一种培养基粉末的生产方法|
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    2018-04-11| MM4A| Annulment or lapse of patent due to non-payment of fees|
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